人CDH22基因RNAi慢病毒载体的构建及稳定干扰CDH22基因的表达
周军
李建明
杨发达
柳玉红
丁彦青
1.南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学病理学教研室,教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,广东广州,5105152.南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学病理学教研室,教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,广东广州,5105153.南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学病理学教研室,教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,广东广州,5105154.南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学病理学教研室,教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,广东广州,5105155.南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学病理学教研室,教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,广东广州,510515
摘要：目的 构建人CDH22基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默大肠癌细胞的CDH22基因表达,为研究CDH22在大肠癌转移中参与的信号转导机制提供研究基础.方法 利用在线软件设计人CDH22基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核酸后克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,测序.得到的阳性重组子再与慢病毒载体进行重组,获得真核表达慢病毒干扰载体.在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助质粒和CDH22基因重组慢病毒载体导入293FT细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染大肠癌细胞SW480,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰CDH22基因的细胞亚系.结果 成功构建CDH22真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒滴度为8×105U/ml.荧光定量PCR结果表明,所获得的细胞克隆11中CDH22 mRNA水平的表达显著降低.结论 成功构建出CDH22基因慢病毒RNAi表达载体,并获得CDH22基因稳定干扰的大肠癌细胞亚系,为研究CDH22在大肠癌转移中的作用机制提供了研究基础.
关键词：CDH22RNA干扰慢病毒结直肠癌
分类号：R322(人体形态学)
资助基金：国家自然科学基金(30500241)国家自然科学基金(30670968)国家自然科学基金(30700286)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 589-592 )
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