人p53不同突变体的构建、表达及其对亚砷酸盐诱导细胞凋亡的影响
刘爱华1
龚小卫2
魏洁2
明小燕2
王达安2
邓鹏2
罗深秋3
姜勇2
1.南方医科大学南方医院呼吸科2.南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室3.南方医科大学细胞生物学教研室,广东,广州,510515
摘要：目的 构建人p53的不同突变体,并在真核细胞中表达,研究这些突变体对应激刺激诱导细胞凋亡的影响.方法 采用PCR方法扩增人p53 cDNA序列,使用常规酶切、连接方法将其重组至pcDNA3/HA载体中,对阳性克隆进行酶切和PCR鉴定.将阳性重组体的第15位和第46位丝氨酸突变为丙氨酸,并转染NIH3T3细胞,观察其在NIH3T3细胞内的表达情况.转染不同突变体的NIH3T3细胞用Annexin V-FITC和碘化丙啶双标后,利用流式细胞术检测亚砷酸盐刺激前后的凋亡情况.结果 构建的pcDNA3/HA-p53(WT)、pcDNA3/HA-p53(S15A)peDNA3/I-IA-p53(S46A)是正确的,且能在NIH3T3细胞内有效表达.流式细胞术检测表明,p53(WT)的表达使亚砷酸盐诱导的细胞凋亡增加,p53(S15A)的表达使细胞凋亡减少.而p53(S46A)没有明显影响.结论 p53的第15位丝氨酸在其介导亚砷酸盐诱导的细胞凋亡中具有重要作用.
关键词：p53定点突变载体构建基因表达细胞凋亡亚砷酸盐
分类号：Q25(细胞生理学)Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(30572151)国家自然科学基金(U0632004)广东省自然科学基金(05004730)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 671-674 )
英文信息