基因重组毕赤酵母表达瑞替普酶过程中的酶活性分析
邹敏1
储炬2
1.南方医科大学药学院,广东,广州,5105152.华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237
摘要：目的 研究毕赤酵母诱导表达瑞替普酶过程中的关键酶活性.方法 以摇瓶培养为研究对象,在用甲醇诱导后,连续取样,破碎菌体制成无细胞悬液,检测乙醇氧化酶、甲醛脱氢酶、PDC、G-6-PD、ID、α-KGD和SD的活性.结果 乙醇氧化酶比活在0～6 h逐渐增加,在第6h达到最大44.5 U/mg蛋白.随后迅速下降.在第24～48 h有所回升,然后又逐渐降低.FAD比活在第0～48h逐渐增加.在第48h达到最大值6.72U/mg蛋白,随后逐渐降低.直至放瓶.G-6-PD比活在第2h～6h逐渐增加,在第6～24h逐渐降低,在第24～48h逐渐升高,48h后又逐渐降低直至放瓶.PDC比活在第0～6h逐渐降低,随后略有升高的趋势.ID、α-KGD、SD的活性变化有相似趋势.在前6 h酶活均迅速下降,在第6～24 h缓慢下降,随后ID活性继续缓慢下降,而α-KGD和SD活性在第2～48 h逐渐升高,在第48 h均达到最高值,然后又逐渐降低,直至放瓶.结论 根据酶活变化规律,可将整个诱导期分为4个阶段:第1阶段为诱导0～6 h,是甲醇适应期;第Ⅱ阶段为诱导6～24h,是快速生长期;第Ⅲ阶段为诱导24～48h,是产物积累期;第Ⅳ阶段为诱导48～72h,是代谢缓慢期.在甲醇适应期,甲醇完全氧化代谢流占主导地位.在快速生长期和产物积累期,代谢流逐渐向糖酵解途径和TCA循环途径迁移.
关键词：毕赤酵母瑞替普酶酶活性
分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)R977.6(药品)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2002AA217021)国家高技术研究发展计划（863计划）(2002AA223451)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1534-1537 )
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