SARS 冠状病毒S2蛋白胞外段的原核表达及其细胞膜融合效应研究
刘芸1
刘爱华2
邓鹏1
吴向玲1
李涛1
刘亚伟1
徐佳1
姜勇1
1.南方医科大学病理生理学教研室,广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105152.南方医科大学南方医院呼吸科,广东,广州,510515
摘要：目的 构建SARS冠状病毒S2蛋白胞外段( S2ED)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白表达质粒,获得在原核细胞中表达的目的 蛋白.方法 在生物信息学预测基础上,利用PCR方法 扩增S2ED和EGFP的编码序列,插入到质粒pET-14b中构建融合表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白His-S2ED-EGFP.采用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白可溶部分,利用SDS-PAGE和免疫印迹的方法 鉴定纯化后的蛋白,通过荧光显微镜考察S2ED与Hela细胞胞膜能否发生融合效应.结果 重组质粒pET-14b-S2ED- EGFP的构建正确无误,并能够在BL21(DE3)中高效表达.纯化后的蛋白与Hela细胞孵育后,未观察到蛋白通过膜融合的过程内化进入细胞.结论 S2ED的绿色荧光蛋白融合表达载体构建成功,并在原核细胞中获得了部分可溶的表达和有效的纯化.虽然原核表达的重组蛋白未能在Hela细胞上发挥预期的生物学效应,但是该工作将为加深S2蛋白介导的胞膜融合过程的认识以及未来进行以特异性细胞结合肽为基础的定向靶细胞转运系统研究奠定重要的基础.
关键词：SARS冠状病毒S2蛋白胞外段蛋白表达细胞膜融合
分类号：Q932(微生物细胞学)
资助基金：国家自然科学基金(30572151)广东省自然科学基金(05004730)广州市科技计划(2007J1-C0301,2002Z3-C7081)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 381-386 )
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