SA/hIL-15融合蛋白的制备及生物学活性鉴定
苏华1
陈艳丽1
陈素云1
余宏盛1
文波1
胡志明2
高基民3
1.温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室,浙江,温州,3250352.南方医科大学生物技术学院,广东,广州,5105153.温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室,浙江,温州,325035;南方医科大学生物技术学院,广东,广州,510515
摘要：目的 制备链亲和素(SA)/人白细胞介素-15 (hIL-15)融合蛋白SA-hIL15和hIL-15-SA,并鉴定其生物学活性.方法 构建原核表达质粒pET24a-6His-SA-hIL-15和pET32a-hIL-15-SA-6His,转化大肠杆菌BL21(DE3),用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,并对其进行复性.CCK-8检测融合蛋白PHA刺激的人外周血淋巴细胞增殖的活性,流式细胞仪分析融合蛋白对生物素化的B16.F10细胞锚定修饰率.结果 成功构建了两种重组融合蛋白的表达质粒并在大肠杆菌实现了高效表达,目标蛋白的表达约占细菌总蛋白的20%.经纯化、复性的SA/hIL-15融合蛋白具有双重活性,即:能促进PHA激活的人外周血淋巴细胞增殖的hIL-15活性,和SA介导的高效结合至表面已生物素化的B16.F10肿瘤细胞的功能(表面锚定修饰效率大于95%).SA-hIL-15双功能融合蛋白促进PHA激活的人外周血淋巴细胞增殖活性高于hIL-15-SA双功能融合蛋白.结论 SA/hIL-15双功能融合蛋白的制备为hIL-15表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研制打下了基础.
关键词：白细胞介素-15链亲和素融合蛋白
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(863;2006AA02Z4C4)广东省自然科学基金(06301184)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 397-401 )
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