SA-TNF-α融合蛋白高效表达、纯化及复性研究
徐翠香
胡志明
李金龙
高基民
1.南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,5105152.南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,5105153.南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,5105154.南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,510515
摘要：目的 研究链亲和素标记的人肿瘤坏死因子α(SA-TNF-α)融合蛋白的纯化、复性方法 ,并研究其生物学功能.方法 在大肠杆菌中表达SA-TNF-α融合蛋白,对表达的SA-TNF-α融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,分别在尿素体系和盐酸胍体系中复性,Western blot对其进行鉴定.MTT法检测SA-TNF-α融合蛋白对L929细胞的杀伤活性,流式细胞仪分析SA-TNF-α融合蛋白对生物素化的MB49细胞锚定修饰率.结果 SA-TNF-α融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,表达的目标蛋白占菌体蛋白30%以上,镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱纯化的SA-TNF-α融合蛋白纯度达到95.7%,经过两种体系复性形成的SA-TNF-α融合蛋白的二聚体和多聚体均具有双功能活性:既对L929细胞有杀伤活性又能锚定修饰生物素化的MB49细胞,锚定修饰率大于90%.结论 初步建立了SA-TNF-α融合蛋白制备工艺,SA- TNF-α二聚体和多聚体均具有双功能活性,SA-TNF-α融合蛋白的研制有望为肿瘤的治疗提供新的治疗方法 及新型药物.
关键词：人肿瘤坏死因子α链亲和素融合蛋白蛋白纯化蛋白复性
分类号：R392(医学免疫学)
资助基金：国家"863"计划(2006AA02Z4C4)广东省自然科学基金(06301184)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 412-415 )
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