人端粒酶RNA突变体酵母三杂交诱饵质粒的构建
曹莹1
王卫国1
李琳2
张慧敏1
王广发1
庞建新1
吴曙光1
1.南方医科大学药学院新药评价中心,广东,广州,5105152.南方医科大学药学院药理学系,广东,广州,510515
摘要：目的 对人端粒酶RNA进行多位点的突变并构建该突变体的酵母三杂交诱饵质粒,且进行毒性检测.方法 根据人端粒酶RNA(hTR)序列及突,变位点设计引物,运用重叠延伸PCR法埘hTR基因的第41位、第80位及第102位碱基进行T→A突变,将突变后的片段克隆入PMD18T载体.经测序正确后再亚克隆到酵母三杂交诱饵质粒PRH3′中,PCR及酶切鉴定.鉴定成功的重组诱饵质粒转化到酵母细胞L40ura3/pHyblex/ZeoMS2进行毒性检测.结果 经过测序验证,该基因预期位点突变成功且其他序列未发生随机突变,重组诱饵质粒构建成功,转化酵母菌之后对宿主无毒性.结论 成功构建了hTR突变体的重组质粒PRH3′-hTRm,可作为酵母三杂交系统中的"诱饵".
关键词：人端粒酶RNA酵母三杂交重叠延伸PCR定点突变诱饵质粒
分类号：R73-3(肿瘤学实验研究)
资助基金：国家自然科学基金(306724487)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 652-655 )
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