肠出血性大肠杆菌O157:H7紧密黏附素的基因克隆、表达及功能研究
彭丽娟1
周勇2
杨瑜1
惠长野1
赵卫1
万成松1
1.南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系,广东,广州,5105152.广州市疾病预防控制中心,广东,广州,510380
摘要：目的 获得高纯度的eae基因表达蛋白紧密黏附素(Intimin),研究其黏附作用.方法 从肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7全基因组中扩增出eae基因,T-A克隆后,将eae插入载体pET28a(+),并转化至E.coli BL21(DE3)中表达;用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化出重组蛋白;SDS-PAGE检测目的 蛋白相对分子质量,免疫印记分析其免疫反应性,免疫荧光检测其黏附性.结果 获得了大小约2805 bp的eae片段;构建r重组载体pET28a(+)-eae,并在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达Intimin,Mr约97 000;Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化出Intimin;大肠杆菌O157:H7多抗血清在Mr约97 000处检测出一条特异性Intimin带;Intimin可黏附在HEp-2细胞表面.结论 高纯度的重组蛋白Intimin具有一定的免疫反应性,能与HEp-2细胞黏附,为进一步研究Intimin蛋白与宿主受体蛋白的相互作用奠定基础.
关键词：肠出血性大肠杆菌O157H7eae紧密黏附素基因克隆重组表达免疫印记免疫荧光
分类号：R378.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：广东省NBC项目(2006B33761001-13)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 707-710 )
英文信息