PTEN重组腺病毒载体的构建及其在气道平滑肌细胞的表达
钟浩海1
罗雅玲1
赖文岩2
徐健3
陈丽丽1
叶涵1
1.南方医科大学南方医院,呼吸内科,广东,广州,5105152.南方医科大学南方医院,心内科实验室,广东,广州,5105153.南方医科大学南方医院,肾移植科,广东,广州,510515
摘要：目的 应用pAdxsi载体系统构建携带PTEN基因的腺病毒载体.方法 将PTEN cDNA自载体pcDNA3-PTEN中切出,克隆至穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdxsi在化学感受态细胞DH5α菌株内同源重组,经Pac-Ⅰ线性化后,重组子通过脂质体2000介导转染HEK293细胞,产生有感染能力的腺病毒,并测定其滴度,通过荧光显微镜能观察HEK293细胞内绿色荧光的表达;PCR检测腺病毒载体PTEN mRNA的表达,Western blotting检测PTEN蛋白在气道平滑肌细胞的表达.结果 感染腺病毒载体的HEK293细胞表达GFP随着时间逐渐增强,并且出现明显的细胞病变效应,经过3轮扩增后病毒达到合适的滴度,构建的Ad-PTEN腺病毒滴度为2×1010pfu/ml,PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳证实其表达,Western blotting检测纠腺病毒感染的气道平滑肌细胞内PTEN蛋白表达明显增高.结论 成功构建了携带野生型PTEN腺病毒载体,为进一步研究PTEN基因应用于哮喘治疗提供了实验基础.
关键词：PTEN腺病毒载体气道平滑肌细胞哮喘
分类号：R562.25(呼吸系及胸部疾病)
资助基金：国家自然科学基金(30770936)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 859-863 )
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