人分化抑制因子Id-2基因在大肠埃希氏菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备
童铁钢1
林燕2
穆丹梅3
白宇1
杨木蕾4
郑敏4
吴东来1
1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部兽医公共卫生重点开放实验室,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,1500012.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部兽医公共卫生重点开放实验室,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;黑龙江大学生命科学院,黑龙江,哈尔滨,1500803.哈尔滨医科大学附属第一医院,黑龙江,哈尔滨,150001;大庆油田总医院腹部超声室,黑龙江,大庆,1630014.哈尔滨医科大学附属第一医院,黑龙江,哈尔滨,150001
摘要：目的 在大肠杆菌中表达人Id-2与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗人Id-2的多克隆抗体.方法 从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增Id-2基因的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-ld-2蛋白,SDS-PAGE分析表达产物.通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-2融合蛋白,Western-Blot检测重组抗原的免疫原性,并以此为抗原制备多克隆抗体.结果 经PCR、酶切、测序鉴定证明,Id-2基因已正确克隆至pGEX-6P-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量40 000的GST-Id-2融合蛋白.Western-Blot、ELISA和琼脂双向扩散实验鉴定所制备的多克隆抗体可以与GST-Id-2特异性反应.结论 Id-2基因在在大肠杆菌中的成功表达及制备的多克隆抗体,为检测Id-2及其在各种组织中的表达提供了一种检测方法,也为分析Id-2分子结构及抗原表位奠定了基础.
关键词：人Id-2基因基因表达多克隆抗体
分类号：R392.1(医学免疫学)
资助基金：黑龙江省自然科学基金重点项目(ZJY-0603-02)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1094-1097,1110 )
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