靶向hTERT基因表达载体的构建和其对人乳腺癌细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响
刘祥厦1
姚陈2
张辉3
王三明2
王深明2
1.中山大学附属第一医院整形外科,广东,广州,5100802.中山大学附属第一医院乳腺外科,广东,广州,5100803.中山大学附属第一医院麻醉科,广东,广州,510080
摘要：目的 构建靶向端粒酶hTERT基因mRNA的shRNA质粒表达载体,转染人乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,探讨其对细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响.方法 设计合成端粒酶hTERT基因特异性shRNA干扰序列,重组pSuper-retro-puro质粒.转染乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(转染组),设立正常培养乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(阴性对照组)和pSuper-retro-puro质粒转染的乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(空白对照组).利用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性,MTT实验及琼脂糖细胞集落形成实验检测细胞增殖能力等.结果 成功构建pSuper-retro-puro-TERT RNAi#1、#2 质粒并转染乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,转染后细胞端粒酶活性较转染前明显下调,差异有统计学意义(P<0.005);MTT法检测细胞增殖能力显示.MCF-7及MDA-MB231转染组细胞增殖活性较阴性对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);软琼脂集落形成实验表明MCF-7和MDA-MB231转染组细胞克隆形成能力较阴性对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.001).结论 通过RNAi技术特异性干扰hTERT基因mRNA表达可显著下调细胞端粒酶活性,并可导致细胞增殖能力的减弱.以端粒酶为靶点的基因治疗可能是乳腺癌治疗的一种有效方法.
关键词：乳腺癌端粒酶hTERTRNA干扰基因治疗
分类号：R737.31(泌尿生殖器肿瘤)
资助基金：广东省自然科学基金(021907)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2187-2190 )
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