SiRNA稳定靶向干扰HDGF肺腺癌细胞株的建立及干扰效率检测
孟婕
曹立明
胡成平
郑智远
1.中南大学湘雅医院呼吸科,湖南,长沙,4100082.中南大学湘雅医院呼吸科,湖南,长沙,4100083.中南大学湘雅医院呼吸科,湖南,长沙,4100084.中南大学湘雅医院呼吸科,湖南,长沙,410008
摘要：目的 构建针对肝癌衍生生长因子(HDGF)基因的siRNA表达载体,建立稳定干扰HDGF基因表达的肺腺癌细胞株,检测干扰效率.方法 实时荧光定量PCR比较肺腺癌细胞株SPC-A-1、10例肺腺癌组织和其配对的癌旁肺组织HDGF基因表达差异.构建shRNA-HDGF慢病毒表达载体,测序鉴定序列的正确性.随后用脂质体的方法将载体转染入肺腺癌细胞株SPC-A-1中,经杀稻瘟菌素筛选后,稳定表达siRNA-HDGF的细胞株单克隆细胞株建立.实时荧光定量PCR检测干扰效率,筛选干扰效率最高的细胞株.结果 HDGF基因在腺癌细胞株SPC-A-1和肺腺癌组织明显高表达.测序证实,构人慢病毒载体中shRNA序列正确.一共筛选了5个siRNA-HDGF细胞株.与对照载体和单纯细胞株相比,最高干扰HDGF表达的效率为75%.结论 HDGF基因在肺腺癌细胞株及肺癌组织中高表达;针对HDGF的siRNA慢病毒表达载体成功构建;在其导人肺腺癌细胞株后能稳定干扰HDGF基因的表达.
关键词：肝癌衍生生长因子siRNA肺肿瘤
分类号：R734.2(呼吸系肿瘤)R392.11(医学免疫学)
资助基金：湖南省科技计划项目(2007FJ4159)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2233-2236 )
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