构建和鉴定PTEN基因的shRNA重组腺病毒表达载体
韦永琼1
曾照芳1
陈力学2
1.重庆医科大学医学检验系/临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆,4000162.重庆医科大学第一附属医院重庆市神经病学重点实验室,重庆,400016
摘要：目的 构建PTEN特异性shRNA重组腺病毒表达载体.为应用基因沉默技术进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定基础.方法 将前期构建的PTEN shRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack,酶切及DNA测序鉴定后,将含PTEN基因的重组穿梭质粒pAdTrack-U6-shRNA经PmeⅠ线性化后转化人pAdEasy-1感受态细菌.pAd-U6-shRNA质粒经PacⅠ线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-shRNA,并进行PCR鉴定、病毒滴度测定及Western blotting检测受感染海马神经元细胞内PTEN蛋白的表达.结果 证实pAdTrack-U6-shRNA及pAd-U6-shRNA质粒构建正确,收获病毒后PCR及DNA测序结果证明Ad-U6-shRNA包被成功,受腺病毒感染海马神经元细胞内PTEN蛋白表达明显降低.结论 成功构建了PTEN基因的shRNA重组腺病毒载体Ad-U6-shRNA,为应用基因沉默技术研究PTEN对缺血性脑损伤后的神经保护作用奠定了基础.
关键词：PTEN基凶RNA干扰腺病毒表达载体
分类号：R741(神经病学)R394(医学遗传学)
资助基金：重庆市自然科学基金(2007BB5287)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 2414-2417,2420 )
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