细胞周期蛋白D1重组质粒的构建及其在鼻咽癌细胞中的表达
柏志全1
张海峰1
陈丽新2
朱林燕2
左婉红1
和树同1
王立伟1
1.暨南大学医学院生理学教研室,广东,广州,5106322.暨南大学医学院药理教研室,广东,广州,510632
摘要：目的 克隆人细胞周期蛋白D1基因,构建真核表达载体,诱导并鉴定其表达.方法 利用RT-PCR法,以低分化鼻咽癌CNE-22细胞mRNA为模板,扩增周期蛋白D1基因,构建重组装达载体pIRES2-EGFP-D1和pEGFP-C2-D1,用脂质体Lipofectamine~(TM) 2000将重组质粒转染到低分化鼻咽癌CNE-22细胞,诱导其表达,免疫荧光、Western blotting等鉴定其表达.结果 电泳获得918 bp预期片段,重组质粒经酶切、PCR和测序分析证实含有周期蛋白D1完整读码框,将重组质粒导人CNE-2Z细胞并成功表达,目的 蛋白经免疫荧光和Western blotting鉴定具有生物学活性.结论成功克隆并构建含周期蛋白D1基因的真核表达GFP质粒,为进一步研究周期蛋白D1在鼻咽癌CNE-22细胞中的作用奠定基础.
关键词：细胞周期蛋白D1绿色荧光蛋白质粒构建免疫荧光免疫印迹
分类号：Q51(蛋白质)Q78(基因工程（遗传工程）)R739.6(耳鼻咽喉肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(30871267、30870567、30771106)广东省自然科学基金(07005974)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 202-205 )
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