猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达
方强1
骆江坤2
崔琢3
齐文娟2
胡元生4
沈继龙4
1.蚌埠医学院病原生物学教研室,安徽,蚌埠,233030;蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽,蚌埠,2330302.蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽,蚌埠,233030;蚌埠医学院免疫学教研室,安徽,蚌埠,2330303.蚌埠医学院第一附属医院,安徽,蚌埠,2330044.安徽医科大学病原生物学教研室,安徽,合肥,230032
摘要：目的 克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达.方法 利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni~+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度.采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的 蛋白进行分析和鉴定.结果 RT-PCR扩增出的片段长度为1056 bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变.转化有重组质粒的E.coliBL21(DE3)经过0.05 mmol/L IPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%.结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础.
关键词：猪囊尾蚴抗原cC1克隆原核表达条件优化
分类号：R383.3(医学寄生虫学)
资助基金：国家自然科学基金(30600518/C030112)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 206-209 )
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