组蛋白脱乙酰化酶4N-末端和C-末端片段的原核表达及纯化
杨洋
覃小翠
刘书虎
黄威
王雪敏
1.南方医科大学基础医学院神经生物学教研室,广东,广州,5105152.南方医科大学基础医学院神经生物学教研室,广东,广州,5105153.南方医科大学基础医学院神经生物学教研室,广东,广州,5105154.南方医科大学基础医学院神经生物学教研室,广东,广州,5105155.南方医科大学基础医学院神经生物学教研室,广东,广州,510515
摘要：目的 在大肠杆菌中分别表达组蛋白脱乙酰化酶4(HDAC4)N-末端(1-1950bp)和C-末端(1708-3255 bp)片段与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并进行纯化.方法 应用PCR方法扩增HDAC4 N-末端和C-末端片段,将目的基因插入GST融合载体pGEX-6P-1中,重组载体在酶切鉴定和序列测定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达GST-HDAC4-N'和GST-HDAC4-C'蛋白.经SDS-PAGE及Western blotting鉴定表达产物后,用谷胱苷肽琼脂糖珠纯化目的蛋白.结果 经测序、酶切鉴定证明成功构建了融合蛋白表达质粒,表达出的融合蛋白经SDS-PAGE分析其相对分子量约为110500和93080.Western blotting分析证实融合蛋白可以被HDAC4特异性抗体所识别.结论 成功构建了融合表达载体(pGEX-6P-1/HDAC4-N'和pGEX-6P-1/HDAC4-C'),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可以进一步用于HDAC4与其他蛋白质相瓦作用的研究.
关键词：组蛋白脱乙酰化酶4原核表达融合蛋白
分类号：R34(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30770739)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 712-715 )
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