SA/hIL21双功能融合蛋白的表达、纯化及生物学活性检测
法萍萍
张振
李金龙
胡志明
高基民
1.南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,5105152.南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,5105153.南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,5105154.南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,5105155.南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,510515
摘要：目的 制备链亲和素(SA)标记的人白细胞介素21融合蛋白(SA-hIL-21),检测其生物学活性.方法 构建hIL21-SA-pET21及pET24a-SA-hIL21质粒,利用大肠杆菌BL21(DE3)表达两种双功能融合蛋白,并利用镍金属螯合层析柱(Ni-NTA)纯化,之后透析复性,Western blotting进行鉴定,最后利用MTT法检测hIL21-SA及SA-hIL21融合蛋白与抗CD3单克隆抗体(anti-CD3)共刺激人外周血淋巴细胞的增殖活性,流式细胞仪分析两种融合蛋白对生物素化的MB49肿瘤细胞的锚定修饰效率.结果 hIL21-SA及SA-hIL21重组融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,约占菌体蛋白的30%,经复性后hIL21-SA及SA-hlL21具有了双重活性,即不仅可以与抗CD3单抗共刺激淋巴细胞的增殖,而且具有了SA介导的高效结合已生物素化的MB49肿瘤细胞表面的功能(表面修饰效率95.18%,96.91%).结论 本实验成功研制了具有双重活性的hIL21-SA及SA-hlL21融合蛋白,两种融合蛋白的双功能活性无显著性差异,该项研究为SA/hIL21双功能融合蛋白应用于肿瘤疫苗以及肿瘤局部治疗奠定了基础.
关键词：白细胞介素21链亲和素融合蛋白锚定
分类号：R392(医学免疫学)Q81(生物工程学(生物技术))
资助基金：国家863高技术研究发展计划(2006AA02Z4C4)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1240-1243,1249 )
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