miR-148a克隆及逆转录病毒载体构建
徐学虎
全天一
曾伟霞
陈欣洁
李伟明
1.广州医学院第三附属医院普通外科,广东,广州,5101502.广州医学院第三附属医院普通外科,广东,广州,5101503.广州医学院第三附属医院普通外科,广东,广州,5101504.广州医学院第三附属医院普通外科,广东,广州,5101505.广州医学院第三附属医院普通外科,广东,广州,510150
摘要：目的 克隆微小RNA hsa-miR-148a并构建逆转录病毒表达载体.方法 将PCR扩增得到的miR-148a前体序列和pMSCV载体经双酶切连接产生pMSCV-miR-148a逆转录病毒表达载体,双酶切后测序鉴定,筛选阳性克隆.用pMSCV-miR-148a和PIK packaging质粒以磷酸钙共沉淀法转染包装细胞293FT,包装产生逆转录病毒.将病毒感染NIH3T3细胞进行滴度测定.结果 经双酶切鉴定和测序证实,成功构建了miR-148a的逆转录病毒表达载体pMSCV-miR-148a.并测得病毒滴度为5×108CFU/ml.结论 以miR-148a前体序列构建的逆转录病毒表达载体pMSCV-miR-148a能够产生高滴度的逆转录病毒,为深入研究miR-148a的生物学功能奠定了基础.
关键词：has-miR-148aDNA甲基转移酶肿瘤甲基化逆转录病毒
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：广东省科学事业费计划项目(2006B36030012)广东省卫生厅(A2008287)广东省科技计划项目(粤科规划字[2009]198号)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1545-1547,1557 )
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