TLR2基因稳定沉默膀胱癌细胞株T739-TLR2△建立及生物学特征鉴定
危建安
曾星
韩凌
黄羽
1.广州中医药大学第二临床医学院中心实验室,广东,广州,5100062.广州中医药大学第二临床医学院中心实验室,广东,广州,5100063.广州中医药大学第二临床医学院中心实验室,广东,广州,5100064.广州中医药大学第二临床医学院中心实验室,广东,广州,510006
摘要：目的 通过载体表达的RNA干扰技术(RNAi)阻断小鼠膀胱癌T739细胞TLR2基因的表达,建立TLR2基因稳定沉默的细胞株.方法 构建3种pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-TLR2重组质粒,脂质体法转染T739细胞,用RT-PCR法筛选干扰效果最强的重组质粒.再将该重组质粒转染T739细胞,用杀稻瘟菌素筛选抗性细胞克隆,即获得TLR2受体及其mRNA稳定表达最低的稳转细胞株,并鉴定其生物学特征.结果 测序结果显示设计合成的DNA片段已正确插入载体,将沉默效果最强的重组质粒pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-TLR2转染T739细胞,筛选出有效沉默T739细胞TLR2基因表达的细胞株T739-TLR2△.TLR2 mRNA和受体表达分别下降95%和90%以上;T739-TLR2△细胞增殖指数降低、群体倍增时间延长,未发现明显凋亡细胞.结论 构建pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-TLR2重组质粒能稳定抑制T739细胞TLR2表达,可用于研究TLR2基因在T739细胞的功能与作用.
关键词：RNA干扰基因沉默Toll样受体2膀胱肿瘤
分类号：R737.14(泌尿生殖器肿瘤)R73-35(肿瘤学实验研究)
资助基金：国家自然科学基金(30873426)高等学校博士学科点专项科研基金(200805720010)中医药科研项目(2009191)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1797-1800 )
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