LUNX基因增强子的克隆及调控活性分析
邓永键
王爽
郑林
唐娜
肖小琴
1.南方医科大学基础医学院病理学系,广东,广州,5105152.南方医科大学基础医学院病理学系,广东,广州,5105153.南方医科大学基础医学院病理学系,广东,广州,5105154.南方医科大学基础医学院病理学系,广东,广州,5105155.南方医科大学基础医学院病理学系,广东,广州,510515
摘要：目的 鉴定人肺特异性X蛋白(lungspecific X protein,LUNX)基因的增强子及其调控活性.方法 以人基因组DNA为模板,PCR扩增生物信息学预测的3个增强子片段(E1:+3770～+3959bp;E2:+6454～+6555bp;E3:+14553～+14652bp),通过荧光素酶报告基因表达体系检测转录活性.结果 PCR产物经测序证实后,分别定向连接至pGL3-Promoter载体中报告基因启动子上游的KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点和报告基因下游的BamHI和SalⅠ酶切位点上,经酶切鉴定后,构建了6种荧光素酶报告基因表达体系.以pSV-β-Galactosidase质粒为内对照,瞬时转染HEK293细胞,培养48h后检测细胞裂解液中荧光素酶活性.当3个DNA片段位于报告基因启动子上游时,均不具有增强转录的能力.将它们分别连接于报告基因下游时,E1和E3所调控的荧光索酶活性分别是对照pGL3-Promoter的2.83倍(P<0.05)和1.59倍(p<0.05).结论 LUNX基因的+3770～+3959bp和+14553～+14652bp序列具有增强转录的能力,为LUNX表达调控机制的深入研究奠定了基础.
关键词：LUNX基因增强子转录调控荧光素酶活性
分类号：Q344.13(遗传学分支学科)
资助基金：国家自然科学基金(30770977)南方医科大学基础医学院院长基金(JC0801)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 2025-2029 )
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