特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因SiRNA表达载体的构建、鉴定及对高糖状态下INS-1细胞周期的影响
梁华晟1
薛耀明2
钟宇华1
1.广西医科大学第九附属医院内分泌科,广西,北海,5360002.南方医科大学南方医院内分泌科,广东,广州,510515
摘要：目的 构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因(PTH1R)的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体以及鉴定及观测高糖下对INS-1细胞周期的影响.方法 根据Genbank筛选PTH1R三个阳性克隆及一个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至INS-1细胞中,Westernblotting观察PTH1R表达,鉴定其转染效率,筛选出最佳抑制基因后,应用流式细胞仪检测25mmol/LD-葡萄糖处理INS-1细胞周期.结果 菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确.并能成功转染到INS-1细胞株中,Westernblot筛选最佳抑制基因.细胞周期检测提示PTHIR沉默后抑制INS-1细胞从G0/G1期进入S期.结论 成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,高糖状态下PTH1R表达可能为INS-1细胞自我保护的一种作用.
关键词：甲状旁腺激素受体1基因小干扰RNA小发卡结构RNA转染RNA干扰细胞周期
分类号：R394.3(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(0991294)广西北海市科学研究与技术开发计划(200901059)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2093-2096 )
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