Let-7a表达质粒的构建及其对肺癌A549细胞k-Ras蛋白表达的抑制作用
何晓燕1
陈俊霞1
欧阳溪2
张政1
彭惠民1
1.重庆医科大学,细胞生物学及遗传学教研室,重庆,400016;重庆医科大学,分子医学与肿瘤研究中心,重庆,4000162.重庆医科大学,细胞生物学及遗传学教研室,重庆,400016
摘要：目的 探讨let-7a介导的基因表达调控在肺癌形成中的作用.方法 依据miRBase数据库中hsa-let-7a序列,设计两条寡核苷酸片段,退火处理后克隆至pGenesil-1质粒,构建重组质粒pGenesil-1et-7a,同时设计并构建一个阴性对照质粒pGenesil-control.将pGenesil-let-7a及pGenesil-control转染肺癌A549细胞,经G418筛选.建立稳定表达let-7a-GFP及control-GFP的细胞株.采用MTT比色法检测活细胞数并绘制生长曲线;半定量RT-PCR、Western blotting及免疫细胞化学检测k-Ras表达的差异.结果 经测序证实重组质粒构建成功,与未处理的A549细胞和稳定表达pGenesil-control的细胞相比,在稳定表达pGenesil-let-7a的A549细胞中,细胞生长明显减慢,k-Ras的蛋白表达明显降低,而k-Ras的mRNA水平无明显变化.结论 let-7a在翻译水平抑制了k-Ras的表达,并对细胞生长具有显著的抑制作用.
关键词：微RNAlet-7a肺癌k-Ras基因表达
分类号：R73-3(肿瘤学实验研究)Q78(基因工程（遗传工程）)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 2427-2431 )
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