BNIP3干扰质粒的构建及鉴定
陈明1
张兴梅1
李勃兴1
孙红宇2
李晓文1
高天明1
1.南方医科大学基础医学院,神经生物学教研室,广东,广州,5105152.南方医科大学基础医学院,生理学教研室,广东,广州,510515
摘要：目的 构建大鼠Bcl-2/E1B-19K-interacting protein 3(BNIP3)干扰质粒,研究其对BNIP3蛋白表达水平的影响.方法 利用Invitrogen公司在线软件设计大鼠BNIP3(NM053420)干扰片段,合成互补的单链寡核苷酸,蒋退火后形成的双链克隆人pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR表达载体,连接产物转化感受态细胞,增菌,质粒小量提取并测序.将构建的干扰质粒与大鼠BNIP3表达质粒共转染到HEK293细胞中,采用实时荧光定量PCR和Westem blotting检测对目的 基因的干扰情况.结果 构建的2个干扰质粒经测序证实序列正确,与BNIP3表达质粒共转染后显著抑制外源性BNIP3的mRNA和蛋白表达.结论 成功构建了大鼠BNIP3干扰质粒,为进一步研究BNIP3的功能打下了基础.
关键词：BNIP3RNA干扰HEK293
分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(U0632007)广东省高等学校自然科学研究重点项目(062007)广东省自然科学基金(8451051501000070)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2432-2435 )
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