人NESG1基因慢病毒载体的构建及其在293FT细胞中的表达
刘真1
甄艳2
于晓黎2
江庆萍3
龙捷1
方唯意2
1.广州医学院病理教研室,广东,广州,5101822.南方医科大学肿瘤研究所,广东,广州,5105153.广州医学院附属三医院病理科,广东,广州,510150
摘要：目的 克隆人NESG1基因,构建与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的慢病毒载体pGC-FU-NESG1-EGFP,包装慢病毒,感染293FT细胞并进行鉴定.方法 以NESG1全长克隆为模板扩增其编码框序列,通过限制性内切酶AgeⅠ酶切、T4DNA连接酶连接,将NESG1插入慢病毒载体pGC-FU-EGFP,构建pGC-FU-NESG1-EGFP重组载体.质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经PCR及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒三质粒系统共转染人胚肾细胞系293FT,进行慢病毒包装并测定病毒滴度.病毒感染293FT细胞,荧光显微镜下观察感染效率,Western blot方法检测NESG1-EGFP融合蛋白的表达情况.结果 成功构建慢病毒表达载体pGC-FU-NESG1-EGFP,三质粒共转染293FT细胞后可见大量绿色荧光;浓缩病毒后测定其滴度为2×107TU/ml;以复感染系数MOI为1感染293FT细胞,感染效率在90%以上.Western blot证实细胞表达NESG1.结论 成功构建NESG1慢病毒表达载体,包装得到高滴度慢病毒,为后续感染鼻咽癌细胞,探索其在鼻咽癌发生和发展中的作用奠定了基础.
关键词：NESG1慢病毒增强型绿色荧光蛋白鼻咽癌
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(30870973)广东省自然科学基金(8451051501000314)广东省高等学校优秀青年创新人才培养计划(育苗工程)项目(LYM08084)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 65-68 )
英文信息