人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2基因shRNA载体的鉴定和表达
卢俊
徐世元
崔睿
张庆国
雷洪伊
1.南方医科大学珠江医院麻醉科,广东,广州,5102822.南方医科大学珠江医院麻醉科,广东,广州,5102823.南方医科大学珠江医院麻醉科,广东,广州,5102824.南方医科大学珠江医院麻醉科,广东,广州,5102825.南方医科大学珠江医院麻醉科,广东,广州,510282
摘要：目的 构建针对人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2(AMPKα2)基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA表达载体,转染SH-SY5Y细胞株,观测其对AMPKα2基因的沉默效果.方法 利用Ambion在线设计软件设计针对人AMPKα2基因的shRNA干扰序列,克隆到pGPU6/GFP/Neo质粒载体上.对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析.用质脂体将重组质粒转导SH-SY5Y细胞株,经G418筛选阳性克隆后用RT-PCR和Western blot法检测AMPKα2的mRNA和蛋白表达水平.结果 经DNA测序和酶切鉴定表明,4个shRNA表达载体构建成功.4个重组质粒之一的pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,抑制率为63%.结论 成功构建了针对人AMPKα2基因的shRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA AMPKα2.pGPU6/GFP/Neo-shRNA AMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,为将来应用其研究AMPK在细胞损伤中的作用奠定了基础.
关键词：局麻药RNAi干扰单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2
分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(30972843)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 86-89 )
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