稳定表达新抑癌基因WTX的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞株的建立
陈可绪
王啓名
黄怡哲
吴焕
张庆玲
1.南方医科大学南方医院病理科/南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东,广州,5105152.南方医科大学南方医院病理科/南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东,广州,5105153.南方医科大学南方医院病理科/南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东,广州,5105154.南方医科大学南方医院病理科/南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东,广州,5105155.南方医科大学南方医院病理科/南方医科大学基础医学院病理学教研室,广东,广州,510515
摘要：目的 构建含有全长WTX(Wilms tumor gene on the X chromosome)目的 基因的表达载体,建立稳定表达WTX基因的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞系,为WTX基因功能研究提供保障.方法 以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获得全长WTX cDNA序列,将全长WTX目的 基因序列克隆人带有绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP-NI表达载体,建立pEGFP-WTX表达载体.经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293FT细胞观察报告基因表达情况,判断pEGFP-WTX表达载体构建是否成功.构建成功的pEGFP-WTX表达载体转染人胃癌BGC-823细胞,建立稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞.qRT-PCR及免疫组化检测转染细胞WTX表达.结果 PCR方法从人胚肾293FT细胞扩增获得全长WTX cDNA,经测序鉴定序列完全正确;pEGFP-WTX质粒DNA经酶切鉴定片段大小正确、转染294FT细胞可见清晰的绿色荧光表达.BGC-823/WTX-EGFP细胞能够稳定表达WTX.结论 本研究成功构建了含有全长WTX cDNA的表达载体系统,建立了稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞,为WTX基因功能研究奠定了良好基础.
关键词：WTX293FT细胞载体构建
分类号：R735.2(消化系肿瘤)R-3(医学研究方法)
资助基金：国家自然科学基金(81071989)南方医科大学基础医学院院长基金(B1100364)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 392-396 )
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