冻干重组人三突变型HIF-1α腺病毒生物学效应考察
陶宇
王月刚
魏旋
刘城
陈冬冬
吴平生
1.南方医科大学南方医院心血管内科,广东,广州,5105152.南方医科大学南方医院心血管内科,广东,广州,5105153.南方医科大学南方医院心血管内科,广东,广州,5105154.南方医科大学南方医院心血管内科,广东,广州,5105155.南方医科大学南方医院心血管内科,广东,广州,5105156.南方医科大学南方医院心血管内科,广东,广州,510515
摘要：目的 研究冻干对重组人三突变型HIF-1α病毒(Ad-HIF-1α-564/402/803)生物学效应的影响.方法 将前期构建的Ad-HIF-1α-564/402/803在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化,X-Gal染色法测定重组腺病毒转染效率,在适宜的条件下制成冻于剂.采用MTS试剂盒观察冻干前后Ad-HIF-1α-564/402/803对hMvECs增殖的影响.分别在冻干前、冻干后1 d、6月、12月四个时间点提取病毒DNA,进行PCR及PCR产物测序鉴定重组人三突变型HIF-1α腺病毒基因;并在4个时间点以Ad-HIF-1α-564/402/803转染hMVECs,提取蛋白进行western blot检测HIF-1α蛋白的表达.结果 X-gal染色显示MOI为100pfu/cell时,转染效率趋于稳定.冻干前后重组人三突变型HIF-1α腺病毒对hMVECs增殖影响无显著差异(P>0.05).经PCR及基因测序鉴定,在四个时间点,腺病毒所携带的目的 基因信息无丢失或突变,HIF-1α蛋白表达无差异(P>0.05).结论 冻干能够长期保持重组人三突变型HIF-1α腺病毒的高生物活性.
关键词：HIF-1α重组腺病毒冷冻干燥生物学活性
分类号：R392(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30370587)国家自然科学基金(30800462)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 469-472 )
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