转基因番茄Zeneca B,Da,F实时荧光定量PCR检测体系的建立
麦荣嘉1
陈敏芳1
莫倩珍1
胡良勇2
黎事伦1
唐敏然2
顾晓敏1
蔡永洪2
周伦彬2
周晓红1
1.南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系,广东广州,5105152.广州市计量检测技术研究院,广东广州,510030
摘要：目的 构建转基因番茄Zeneca B,Da,F品系的质粒标准分子及其实时荧光定量PCR(qPCR)检测体系.方法 基于反向遗传学原理构建分别含有番茄内标准基因apx检测序列(ERG-apx),转基因番茄B,Da,F品系pg基因的基因特异性序列(GS-pg)及其构建特异性序列(CS-16S、CS-16A)的番茄内参质粒标准分子pEasy-T3-APX,转基因番茄B,Da,F品系的构建特异性质粒标准分子pEasy-T3-16A、pEasy-T3-16S;以Beacon Designer7.5设计用于定性PCR和qPCR检测的引物对和Taqman探针;基于质粒标准分子建立了定性PCR和qPCR检测体系,对方法的特异性、敏感性、重复性、检测下限等指标进行评估;使用PicoGreen试剂盒对质粒标准分子进行定量,以质粒pEasy-T3-APX为背景DNA定量混有pEasy-T3-16A或pEasy-T3-16S制备成含量为1%和0.1%(w/w)的两组核酸标准物质,进行所构建qPCR检测体系的定量性能评价.结果 锚定qpCR检测靶序列:ERG-apx 108bp,GS-pg 108bp,CS-16S 109bp、CS-16A 102bp;酶切鉴定所构建的质粒标准分子均可得到预期大小,的插入子片段;所建立的实时荧光定量PCR(qPCR)检测体系,重复性的相对标准差(RSD)0.2%～1.5%,检测下限25 copies,标准曲线方程线性关系R2值在0.994～0.998,效率在93.3%～102.4%.经换算系数Cf换算,对PicoGreen定量的样品进行验证,其实测值与真值的偏差是-9.7%～17.3%.结论 成功构建了转基因番茄ZenecaB,Da,F品系的质粒标准分子及其qPCR检测体系,为转基因番茄Zeneca B,Da,F品系转基因成分的监测建立了可行的可供使用的定性与定量检测体系.
关键词：质粒标准分子转基因番茄核酸检测技术荧光定量PCR
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家科技支撑计划(2008BAK41B01)国家自然科学基金(30872204,81071378)广东省自然科学基金(5004747)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 587-593 )
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