慢病毒介导的shRNA靶向干扰nestin鼻咽癌稳定细胞株的建立
李川
马纪
张越
安靓
1.南方医科大学肿瘤研究所,教育部和广东省共建重大疾病转录组与蛋白组学重点实验室,广东广州5105152.南方医科大学肿瘤研究所,教育部和广东省共建重大疾病转录组与蛋白组学重点实验室,广东广州5105153.南方医科大学肿瘤研究所,教育部和广东省共建重大疾病转录组与蛋白组学重点实验室,广东广州5105154.南方医科大学肿瘤研究所,教育部和广东省共建重大疾病转录组与蛋白组学重点实验室,广东广州510515
摘要：目的 检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异,寻找高表达的细胞株.构建nestin基因的shRNA表达载体,建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株.方法 应用Real-time PCR和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水平.构建带GFP的重组靶向nestin shRNA慢病毒表达质粒,筛选阳性克隆,测序鉴定.293T细胞包装病毒,收集病毒上清,测定滴度.经Real-time PCR内源筛靶,选择最佳靶点.将重组慢病毒感染5-8F细胞,Western blotting和Real-time PCR检测nestin的表达.结果 在8种鼻咽癌细胞株中,5-8F细胞中nestin表达较高.PCR和测序验证重组质粒构建成功.慢病毒感染5-8F细胞后,与阴性对照组和空白组相比,nestin的mRNA和蛋白水平明显受到抑制.结论 成功构建了干扰nestin的慢病毒重组质粒,并建立了稳定靶向干扰nestin表达的5-8F鼻咽癌细胞株.
关键词：nestin鼻咽癌细胞慢病毒重组质粒RNA干扰
分类号：R730.2(一般性问题)
资助基金：国家自然科学基金(U0732006)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 604-609 )
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