用于时间分辨荧光免疫分析的结核分枝杆菌培养滤液蛋白10参照品的制备
郭芳芳1
邹立林2
吴英松1
胡志明1
李金龙1
吕建新2
高基民2
1.南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,5105152.温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室/浙江省模式生物技术与应用重点实验室,浙江,温州,325035
摘要：目的 通过基因工程技术制备结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP10)、链亲和素(SA),CFP10融合蛋白(包括SA-CFP10、CFP10-SA),筛选灵敏度最高、稳定性最好者作为时间分辨荧光免疫分析法检测(TRFIA)的参考标准品.方法 以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组为模板,扩增CFP10基因,将其克隆到pET24b、pET24b-SA、pET21a-SA三种载体中,转化到大肠杆菌Rosetta中进行表达,表达产物经镍离子亲和层析(Ni-NTA)柱纯化,透析法复性.三种重组蛋白用双抗体夹心法TRFIA从灵敏度、稳定性两方面进行评价.结果 成功构建了pET24b-CFP10、pET24b-SA-CFP10和pET21a-CFP10-SA三种表达载体,重组蛋白CFP10主要为可溶形式表达,融合蛋白CFP10-SA、SA-CFP10均以包涵体形式存在,Ni-NTA柱纯化后透析复性,纯度均可达90%以上.三种重组蛋白经双抗体夹心TRFIA,CFP10-SA灵敏度最高(0.02μg/L),稳定性最好.结论 得到了灵敏度高、稳定性好的TRFIA检测CFP10的参照品CFP10-SA融合蛋白,为研制该结核分支杆菌时间分辨荧光诊断试剂盒,并应用于临床打下了基础.
关键词：结核分枝杆菌培养滤液蛋白10时间分辨荧光分析法
分类号：R318.13(医用一般科学)
资助基金：国家科技重大专项(2008ZX10301)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 955-959 )
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