重组猪单链IL-12的构建及真核表达
王雪梅1
袁远英2
方强1
夏惠1
孙新1
李柏青3
1.蚌埠医学院病原生物学教研室,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,,安徽蚌埠2330302.广州复大医疗股份有限公司复大医院3.蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院免疫学教研室,安徽蚌埠233030
摘要：目的 克隆猪IL-12 (pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL- 12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达.方法 分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单位编码序列的cDNA,应用重叠延伸PCR技术通过一柔性接头(linker)(Gly4Ser)3串联这两个亚基构建融合基因pscIL-12,将融合基因pscIL- 12插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,通过阳离子聚合物介导转染CHO-K1细胞进行表达,RT-PCR鉴定pscIL-12融合基因在真核细胞中的表达.结果 所克隆的pIL-12 p35亚基和p40亚基的编码基因序列和构建的融合基因pscIL-12序列均经PCR、酶切、测序得以证实；融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录.结论 成功构建了pcDNA3.1 (+)-pscIL- 12融合基因的真核表达质粒；pcDNA3.1 (+)-pscIL- 12在CHO-K1细胞中成功转录,为进一步探讨pscIL-12融合蛋白的生物学活性和疫苗佐剂效应奠定了基础.
关键词：白细胞介素-12单链猪分子克隆真核表达CHO-K1细胞
分类号：R372(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(30600518)国家自然科学基金(C030112)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1687-1692 )
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