重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP的构建及其对K562细胞增殖的影响
史静1
胡晶2
肖青3
彭智2
曹唯希2
罗秋平2
王方2
冯文莉2
1.重庆医科大学附属第一医院检验科,重庆,4000162.重庆医科大学临床血液学教研室,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆4000163.重庆医科大学血液科,重庆,400016
摘要：目的 构建表达SH2-DED融合基因的新型重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP,观察其对K562细胞增殖的抑制作用.方法 重叠PCR扩增SH2-DED融合基因并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建成穿梭质粒pAdT-SD-EGFP并进行酶切和测序鉴定.穿梭质粒经PmeI酶切后转化pAd5F35-GFP的BJ5183感受态,通过细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAd5F35-SD-EGFP及其突变体,PacI酶切后转染AD293细胞进行包装.重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP经PCR和western blot鉴定后进行病毒扩增和滴度测定.体外感染K562细胞,通过MTT和流式周期检测实验观察Ad5F35-SD-EGFP对K562细胞增殖的影响.结果 PCR、酶切和测序结果均表明pAdT-SD-EGFP和pAd5F35-SD-EGFP构建成功；PCR、EGFP检测结果证明重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP包装扩增成功,滴度可达1.4× 1012 pfu/ml.转染K562细胞后,Western blot可检测到目的蛋白的表达,MTT实验和流式周期检测结果证明其对K562细胞的增殖有明显的抑制作用.结论 成功构建并鉴定了携带SH2-DED融合基因的重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP,其对BCR-ABL阳性K562细胞的增殖有明显的抑制作用.
关键词：Bcr-Ab1SH2DED重组腺病毒AD293细胞
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(30871102)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1806-1811 )
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