沙眼衣原体pORF8质粒蛋白克隆表达与定位
李忠玉1
吴移谋1
黄秋林2
粟盛梅1
周洲1
陈超群1
钟光明3
1.南华大学1微生物学与免疫学教研室2.附属第一医院普腹外科,湖南衡阳,4210013.美国德洲大学圣安东尼奥生命科学研究中心微生物学与免疫学系,德州78229
摘要：目的 克隆表达沙眼衣原体pORF8质粒蛋白,并在衣原体感染细胞中对其进行定位分析.方法 PCR法扩增pORF8基因,并将其定向插入pGEX-6p载体构建原核表达重组体pGEX-6p/pORF8,重组体转化E.coli XL1Blue后经IPTG诱导表达pORF8融合蛋白,融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫Balb/C鼠,制备pORF8多克隆抗体；应用免疫荧光试验对pORF8质粒蛋白进行定位.结果 pORF8基因全长为744 bp,编码247个氨基酸残基,pGEX-6p/pORF8在大肠杆菌中表达相对分子质量约为54 000的GST-pORF8融合蛋白,间接免疫荧光实验结果显示pORF8在感染细胞中的表达模式与主要外膜蛋白基本一致,而与衣原体蛋白酶样活性因子分布模式不同.结论pORF8质粒蛋白定位于衣原体菌体上,为衣原体菌体蛋白.该研究为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制奠定了基础.
关键词：沙眼衣原体pORF8质粒蛋白基因克隆定位
分类号：R374.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(30970165,81102230)湖南省自然科学基金(09JJ3059)湖南省高等学校科技创新团队支持计划(2010]53)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1830-1834 )
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