蛋白激酶C激活的荧光共振能量转移分析
李俊青1
江建明1
冯瑞强1
蒋晖1
闫文娟2
杨德鸿1
1.南方医科大学南方医院脊柱骨科,广东广州,5105152.南方医科大学南方医院口腔科,广东广州,510515
摘要：目的 当前,检测蛋白激酶C(PKC)激活的方法尚缺乏灵敏性或直接性,这里我们提供了一种新的直接而灵敏的方法——利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术来构建检测PKC激活的方法.方法 将表达PKC激活的报告分子(CKAR)的质粒单独转染或与表达甲状旁腺素1型受体(PTHR1)的质粒共转染HEK293细胞,培养72 h后用激光共聚焦显微镜检测FRET的变化,并以此判断甲状旁腺素或佛波酯是否激活PKC.结果 在只转染CKAR质粒的HEK293细胞,佛波酯降低了CKAR分子的FRET效率,并使青色荧光与黄色荧光的比值(C/Y)增加,而PTH( 1-34)未能改变C/Y的值.在共转染了CKAR和PTHR1质粒的HEK293细胞,PTH(1-34)则使C/Y增加.结论 PKC激活报告分子可用于检测PKC的激活,该方法也可作为PKC相关信号转导的实验平台.
关键词：蛋白激酶C荧光共振能量转移PKC激活报告分子
分类号：R34(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30973061)广东省自然科学基金(9151051501000087)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1867-1870 )
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