黄粉虫抗菌肽Tenecin基因的克隆、原核表达及其抑菌活性
刘影
姜玉新
李朝品
1.皖南医学院基础医学部,安徽芜湖,2410022.皖南医学院基础医学部,安徽芜湖,2410023.皖南医学院基础医学部,安徽芜湖,241002
摘要：目的 为研究黄粉虫体内抗菌肽表达调控的分子机制,克隆黄粉虫抗菌肽Tenecin基因,并研究其原核表达产物的抑菌活性.方法 用大肠杆菌DH-5α菌液(1×108/ml)腹部注射黄粉虫5龄幼虫,72 h后提取其总RNA,RT-PCR克隆Tenecin 基因,测序并进行生物信息学分析；构建原核表达重组载体pET-28a(+)-Tenecin并转入大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导观察其表达情况；将4种不同浓度的原核表达产物Tenecin蛋白作用于大肠杆菌DH-5α,测量抑菌圈直径大小,观察其抑菌作用.结果 电泳及测序结果显示:Tenecin基因的大小为255 bp左右；用1 mmol/L IPTG诱导后,经SDS-PAGE电泳检测在9 000附近有目的条带,与理论值大小相符；体外抑菌试验表明:试验设3个重复,浓度为80、60、40、20 μg/ml的Tenecin 蛋白与大肠杆菌DH-5α共培养18h后,抑菌圈直径(mm)分别为25.1±0.03、20.7±0.06、17.2±0.11、9.3±0.04.结论 成功克隆黄粉虫抗菌肽Tenecin基因,并成功表达Tenecin蛋白,该蛋白对大肠杆菌DH-5α有明显抑制作用,为后期临床应用奠定基础.
关键词：黄粉虫抗菌肽Tenecin基因克隆原核表达
分类号：R372(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(30872367)安徽省自然科学基金(070413088)皖南医学院中青年科研基金(WK201001)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2002-2005 )
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