慢病毒介导shRNA沉默巢蛋白表达对人黑色素瘤细胞转移特性的影响
杨旭辉1
夏添2
余伟华2
卢晓芳2
项鹏2
何峰3
1.广东省妇幼保健院生殖健康与不孕症科,广东广州,5100102.中山大学中山医学院干细胞与组织工程中心,广东广州,5100803.中山大学药学院,广东广州,510006
摘要：目的 应用慢病毒介导的RNA干扰技术,有效沉默黑色素瘤细胞株UACC903巢蛋白(nestin)的表达,研究其对黑色素瘤细胞转移能力的影响.方法 以人nestin mRNA编码序列作为干扰靶点,以慢病毒基因PLL3.7作为质粒载体,构建靶向人nestin的shRNA表达质粒,另构建不针对任何已知mRNA的阴性对照shRNA表达质粒,分别感染UACC903细胞并流式分选获得高纯度的nestin干扰或对照组细胞.应用RT-PCR、免疫荧光及Western blotting检测不同组别nestin表达的变化.分别用Transwell侵袭试验检测跨膜细胞的数量评估各组黑色素瘤细胞的侵袭能力,划痕法检测迁移能力改变.光镜观察各组细胞形态变化,免疫荧光检测E-cadherin、N-cadherin和β-catenin在不同组别的表达变化.结果 成功构建nestin shRNA慢病毒载体nestin-RNAi-LV.RT-PCR及免疫荧光结果显示干扰组UACC903细胞nestin mRNA及蛋白表达水平较对照组显著降低.nestin下调的UACC903细胞黏附、侵袭及迁移能力下降(P＜0.05).结论 慢病毒介导的shRNA能有效地静默食管癌细胞nestin基因的表达,能抑制黑色素瘤细胞UACC903迁移.
关键词：RNA干扰人黑色素瘤巢蛋白迁移
分类号：R362(病理学)
资助基金：国家自然科学基金(30900729,81173577)广东省自然科学基金(8451008901000380)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 7-13 )
英文信息