华南HCV1b亚型NS5A插入式复制子重组质粒的构建和序列分析
李京涛1
周斌1
周元平1
曾艳丽1
李威1
王俊洁1
张健1
张浩1
刘叔文2
1.南方医科大学南方医院感染内科,广东广州,5105152.南方医科大学药学院,广东广州,510515
摘要：目的 构建来自华南不同慢性丙型肝炎(CHC)患者的HCV NS5A的复制子重组质粒并测序分析,探索HCV NS5A在抗病毒应答中生物学特性.方法 以能够高效复制的1b型HCV复制子质粒为骨架,构成带有MIuⅠ和BclⅠ双酶切位点的开关质粒,采用逆转录-聚合酶链反应从不同CHC患者血清中扩增获得HCV 1b亚型NS5A全长片段,克隆到pMD-18载体中,测序分析其中的PKRBD、ISDR、V3和IRRDR区域的变异情况.扩增产物中无MIu Ⅰ和Bcl Ⅰ酶切序列的,在引物中引入相关酶切序列后再扩增,双酶切后将NS5A区段置换入HCV 1b复制子骨架中.结果 成功扩增出NS5A全长片段并克隆测序,将NSSA区ISDR-V3区域置换入复制子中,测序结果正确.序列比对显示应答株的ISDR和PKRBD氨基酸变异数目比无应答株高；V3和IRRDR区域存在较高氨基酸突变率.结论 成功构建包含华南HCV 1b亚型NS5A核心区域的复制子插入式重组质粒,为研究HCV NS5A生物学特性、干扰素抵抗的机制以及难治性CHC患者的个体化抗病毒治疗分析奠定了基础.
关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白5A复制子系统序列分析
分类号：R373.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(30771899)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 46-49 )
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