人Tau基因多表位肽段原核表达载体的构建与表达
孙海涛1
杨化强2
杨璐军1
李正阳1
杜谋选1
陈宇新1
姜晓丹1
1.南方医科大学广东神经外科研究所;珠江医院神经外科;广东省脑功能修复与再生重点实验室;国家临床重点专科,广东广州5102822.中国科学院广州生物医药与健康研究院华南干细胞与再生医学重点实验室,广东广州,510530
摘要：目的 构建含人Tau多表位肽段基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化目的蛋白,检测Tau多表位DNA疫苗免疫小鼠后特异性抗体产生情况.方法 以质粒pVAX1-Tau为模板,用PCR扩增人Tau多表位肽段基因,插入表达载体pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-TauP1/P2.将鉴定后的阳性重组质粒转入E.coli BL21( DE3)中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并采用GST法纯化、SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达.以TauP1/P2 DNA疫苗免疫小鼠获取血清,Dot-blot检测TauP1/P2特异性抗体产生情况.结果 PCR扩增出约300 bp的基因片段,克隆至表达载体后,经酶切和测序验证正确；获得了纯化的目的蛋白,并证实了GST-TauP1/P2融合蛋白的表达.Dot-blot检测到特异性TauP1/P2抗体的产生.结论 成功构建和表达人Tau多表位肽段基因的目的蛋白GST-TauP1/P2,能够识别Tau多表位DNA疫苗免疫后小鼠产生的特异性TauP1/P2抗体.
关键词：Tau质粒原核表达融合蛋白
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(81171179)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 185-188 )
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