小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及抗原活性检测
董金凯1
罗津2
阎瑾琦3
张亮3
高江平4
于继云3
1.中国人民解放军总医院泌尿外科,北京100853;军事医学科学院基础医学研究所,北京1008502.湖南省永州市人民医院,湖南永州,4250003.军事医学科学院基础医学研究所,北京,1008504.中国人民解放军总医院泌尿外科,北京,100853
摘要：目的 RT-PCR扩增小鼠前列腺干细胞抗原(mPSCA)基因,构建原核表达质粒pET-42a-mPSCA,诱导mPSCA蛋白表达并纯化,并检测mPSCA蛋白的抗原活性.方法 利用RT-PCR的方法从小鼠前列腺癌细胞系RM-1细胞中扩增mPSCA基因,测序正确后PCR的方法去掉mPSCA的信号肽序列将其克隆至原核表达载体pET-42a中构建重组载体pET-42a-mPSCA.将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,随后将表达的融合蛋白进行纯化.经SDS-PAGE分析后,Western blot检测纯化的蛋白,将纯化蛋白进一步包板后用ELISA法对其抗原活性进行评价.结果 测序结果证实成功扩增出全长mPSCA基因；酶切和测序结果证实pET-42a-mPSCA原核表达载体构建成功；转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白；Western blot检测证实纯化的蛋白能与特异性的抗体发生反应；ELISA检测显示纯化后的mPSCA抗原具有免疫原性.结论 成功扩增出小鼠全长PSCA基因,成功构建了mPSCA基因的原核表达载体,获得了纯化的mPSCA蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究以PSCA为靶点的前列腺癌的免疫治疗奠定了基础.
关键词：前列腺干细胞抗原原核表达蛋白纯化前列腺癌
分类号：R31(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金(30840094)国家高技术研究发展计划（863计划）(863;2007AA02Z451)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 502-506 )
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