巢式PCR联合焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒耐药基因检测中的敏感性与特异性分析
孙树梅1
周浩1
周彬2
胡子有3
侯金林2
孙剑2
1.南方医科大学南方医院感染管理科,广州广东,5105152.南方医科大学南方医院感染内科,广州广东,5105153.南方医科大学南方医院临床研究中心,广州广东,510515
摘要：目的 评价巢式PCR联合焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒(HBV)耐药基因检测中的敏感与特异性.方法 选取rtM204I(ATT)突变型和rtM204(ATG)未突变型质粒,按照不同比例混合后,采用巢式PCR联合焦磷酸测序法对突变位点进行检测,并与常规PCR焦磷酸测序法进行比较,对两种方法的线性及一致性进行分析；选取不同病毒载量临床标本,采用巢式PCR焦磷酸测序法检测耐药突变位点,并与巢式PCR Sanger测序法进行比较,对两种方法的敏感性及特异性进行分析.结果 常规PCR焦磷酸测序和巢式PCR焦磷酸测序结果拟合曲线R2＞0.99,P＜0.05,线性模型有显著性意义.分别将常规PCR焦磷酸测序和巢式PCR焦磷酸测序结果与预测值的差值进行分析,巢式PCR能够较常规PCR更好的反映实际值,在90％比例处优于常规PCR.临床75例患者标本巢式PCR Sanger测序与巢式PCR联合焦磷酸测序结果灵敏性比较提示,Sanger测序的灵敏性为92％,巢式PCR联合焦磷酸测序的灵敏性达到100％,差异有统计学意义(P＜0.01).对于不同病毒拷贝数标本的灵敏性不同,其差异主要表现在低浓度组(HBV DNA≤3log10 copies/ml),Sanger测序的灵敏性为78％,而焦磷酸测序的灵敏性可以达到100％,差异有统计学意义(P＜0.01).阴性对照,两种方法均末检出 HBV病毒,两种方法的特异性均较好.结论 巢式PCR联合焦磷酸测序的方法监测乙肝病毒变异同巢式PCR联合sanger测序相比,有更好的灵敏性,尤其是在低病毒拷贝数时,差异明显,这对于临床提早发现耐药突变株,指导临床及时更换用药有重要意义.
关键词：乙型肝炎病毒巢式PCR焦磷酸测序
分类号：R511(传染病)
资助基金：国家十一五重大传染病防治专项(2008ZX10002-004)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 610-613 )
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