抗肿瘤免疫基因治疗剂pVAX-IL-12-GB的构建及体内外表达验证
董金凯1
高江平2
阎瑾琦3
张亮3
肖毅3
王伟3
王晓雄2
于继云3
1.中国人民解放军总医院泌尿外科,北京100853;军事医学科学院基础医学研究所,北京1008502.中国人民解放军总医院泌尿外科,北京,1008533.军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850
摘要：目的 构建能够同时表达人免疫调节因子IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂pVAX-1L- 12-GB,验证以上免疫调节因子基因在293T细胞的表达以及IL-12基因在活体内的表达.方法 将人1L-12基因克隆到早期构建好的pVAX-IRES-GM-CSF-B7.1真核表达质粒的上游,将其构建成为pVAX-IL-12-GB重组质粒:利用脂质体法瞬时转染293T细胞,RT-PCR检测IL-12和GM-CSF-B7,1基因的转录,ELISA法检测细胞上清中上游IL-12基因和下游GM-CSF基因的蛋白表达,流式细胞术及免疫荧光检测下游B7.1基因的表达；利用电穿孔方法递送质粒进入小鼠股四头肌,免疫组化法检测IL-12基因在小鼠活体内的表达情况.结果 双酶切以及PCR鉴定获得的片段均与预期的片段大小一致,测序分析证实IL-12基因序列完全正确；瞬时转染293T细胞后,分别验证了人IL-12,GM-CSF和B7.1基因的mRNA转录和蛋白表达；电穿孔递送质粒后,活体肌肉组织内同样可以检测到IL-12基因的表达.结论 成功构建了可以同时表达人IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂,为下一步开展肿瘤免疫基因治疗研究奠定了坚实的基础.
关键词：肿瘤免疫基因治疗IL-12GM-CSFB7.1电穿孔体内外表达
分类号：R737(泌尿生殖器肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(30840094)国家高技术研究发展计划（863计划）(863;2007AA02Z451)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 760-765 )
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