真核表达BMP4成熟肽及其对iPS细胞的分化抑制作用
丁道芳1
王臻2
徐浩1
徐乐勤1
梁倩倩1
赵永见1
施杞1
王拥军1
1.上海中医药大学龙华医院脊柱病研究所,上海,2000322.复旦大学肿瘤医院中心实验室,上海,200433
摘要：目的 研究BMP4因子在诱导型干细胞(iPS细胞)培养过程中的作用和起作用的相关通路.方法 通过RT-PCR的方法从小鼠的胎盘组织中扩增BMP4成熟肽,并且在其N末端连接IgK分泌肽,此融合的片段克隆至pPYCAG载体上.重组质粒pPYCAG-IgK-BMP4转染至293T17细胞中并进行嘌呤霉素的筛选.通过细胞免疫荧光和Western blot方法鉴定出表达BMP4的阳性克隆.为进一步检测上清中BMP4的生物活性,iPS细胞培养于含BMP4因子的细胞培养上清和LIF因子中,连续培养3代,并进一步观察细胞表型、三胚层细胞的分化潜能和多潜能相关基因的表达水平.结果 Smad1被分泌至上清中的BMP4磷酸化.当培养基中含BMP4同时加入LIF因子后,可以有效抑制iPS细胞分化.在此种方法培养3代后,不仅iPS细胞的表型可以有效维持,iPS细胞中多潜能相关的基因表达水平也未受到影响,同时这些iPS细胞仍具有向三个胚层分化的能力.结论 BMP4可高效表达在真核细胞中,有效地使培养iPS细胞保持其多向分化潜能.
关键词：Igk-BMP4免疫球蛋白κ链过表达诱导型干细胞细胞分化
分类号：R34(基础医学)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1383-1388 )
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