链亲和素标记的人粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子融合蛋白的制备
白莉1
胡志明1
王菲1
许晓玲2
夏昶2
金丽琴2
李金龙1
高基民2
1.南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东 广州,5105152.温州医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室,浙江 温州,325035
摘要：目的 制备链亲和素(SA)标记的人粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(hGM-CSF)融合蛋白SA-hGM-CSF和hGM-CSF-SA,并鉴定其生物学活性.方法 构建原核表达质粒PET24a-6His-SA-L-hGM-CSF和PET24a-hGM-CSF-L-SA-6His,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,并对其进行复性.复性后蛋白用DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析进一步纯化.MTT法检测融合蛋白对人红白血病细胞(TF-1)的增殖活性.流式细胞仪分析融合蛋白对生物素化的MB49细胞锚定修饰效率.结果 SA-hGM-CSF和hGM-CSF-SA两种融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,目标蛋白占菌体蛋白的20％以上,纯化后纯度达到96％以上.两种融合蛋白均具有双功能活性,即同时具有hGM-CSF的促进人红白血病细胞增殖的活性和SA介导的高效结合至表面生物素化的MB49细胞的功能(锚定修饰率大于99％).结论 研制的SA/hGM-CSF融合蛋白具有双重活性,可为研制hGM-CSF表面修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供基础.
关键词：人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子链亲和素肿瘤细胞疫苗融合蛋白
分类号：R34(基础医学)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1389-1393 )
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