miRNA-30a/30e腺病毒表达载体的构建
刘强1
顾金金2
罗敏3
施琼3
1.江苏大学附属医院检验科//镇江市免疫学重点实验室,江苏镇江,2120012.镇江市第一人民医院老年科,江苏镇江,2120023.重庆医科大学医学检验学院,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016
摘要：目的 构建稳定表达成熟miRNA-30a和miRNA-30e腺病毒表达载体.方法 小鼠基因组中分别扩增出带有酶切位点的mmu-miR-30a、mmu-miR-30e目的基因,目的基因连接到穿梭质粒pSES-HUS,带有目的基因的穿梭质粒重组到骨架质粒AdEasy1上,重组质粒转染到Hek-293细胞中包装成腺病毒载体,反复扩增之后获得高滴度的pAd-mmu-miR-30a、pAd-mmu-miR-30e腺病毒.用目的腺病毒分3组(RFP对照组,miR-30a组,miR-30e组)感染小鼠Mefs细胞,用荧光定量PCR方法检测mmu-miR-30a、mmu-miR-30e表达情况.结果 分别扩增出带有酶切位点的357 bpmmu-miR-30a,324 bpmmu-miR-30e,并成功连接到pSES-HUS上,进一步与AdEasy1重组,包装得到腺病毒表达载体,通过荧光定量PCR检测,Mefs细胞中mmu-miR-30a升高26.46±7.46倍,mmu-miR-30e升高2.76±0.25倍.结论 成功构建了成熟miRNA的腺病毒表达载体.
关键词：miRNA-30amiRNA-30eAdEasy系统荧光定量PCR
资助基金：国家自然科学基金(30872770)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 202-206 )
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