采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源膀胱癌特异性抗体基因库
蓝开健1
张哲欢2
梁中锟1
王俊洁1
娄海波1
周元平1
刘叔文3
李长征4
谭万龙1
1.南方医科大学南方医院,广东广州,5105152.南方医科大学汕头市中心医院,广东汕头515000,广东广州5105153.南方医科大学药学院,广东广州,5105154.南方医科大学南方医院,广东广州510515;南方医科大学中医药学院,广东广州510515
摘要：目的 构建大容量且能高效展示于哺乳动物细胞表面的全长人源膀胱癌特异性抗体基因库.方法 分离膀胱癌患者的外周血单核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,用RT-PCR方法扩增全套IgG1重链可变区(VH)和Kappa型轻链全长(LCκ)基因,经过相应的限制性内切酶酶切后分别插入pDGB-HC-TM载体,分别构建膀胱癌特异性的抗体重链基因库和轻链基因库(一级抗体库).随机挑取20个单克隆测定抗体基因序列,并瞬时转染FCHO细胞,结合流式细胞仪检测细胞表面抗体的表达.将上述构建好的轻重链基因库通过4片段连接方法插入双表达载体pDGB4,构建二级抗体库,转染FCHO后用流式细胞仪检测细胞表面抗体表达.结果 分别成功构建了膀胱癌特异性的重链基因库和轻链基因库,随机挑取的轻重链单克隆各有7个和9个含有正确的抗体基因编码序列,且能展示于哺乳动物细胞表面,理论库容量达到3.32×1011[(1.7× 106×70％)×(3.1×105×90％)].成功构建了膀胱癌二级抗体库,库容量为9×105.结论 利用哺乳动物细胞表面展示技术,我们成功构建了膀胱癌特异性的全长人源抗体基因库,一级抗体库的库容量达到3.32× 1011,二级抗体库库容量达到9x105,为下一步筛选特异性、高亲和力抗膀胱癌抗体奠定了基础.
关键词：膀胱癌哺乳动物细胞表面展示全长人源抗体流式细胞仪检测
资助基金：广东省自然科学基金(S2011010003912,S2012040006972)高等学校博士学科点专项科研基金(20124433120002)广东省高等学校优秀青年创新人才培养计划(育苗工程)项目(LYM11037)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 684-691 )
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