结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价
王雪梅1
王英1
薛玉芹1
陈勇2
陶志勇1
夏惠1
唐洁3
方强1
1.蚌埠医学院病原生物学教研室,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠2330302.蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠,2330303.蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院免疫学教研室,安徽蚌埠233030
摘要：目的 构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应.方法 将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒；经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达.重组质粒经体内电转染免疫小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6特异性抗体IgG的水平；流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平；ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数.结果 构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000bp和300bp处各见1条带,测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异.重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光.重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组(空质粒组和生理盐水对照组)明显升高；血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对照组(空质粒组和生理盐水对照组).结论 成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫效应.
关键词：结核分枝杆菌ESAT-6DNA疫苗细胞免疫体液免疫
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 945-950 )
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