蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12负性调控心脏HERG钾通道电流
林吉进
刘树楷
郑方芳
马青艳
余宏
任莉
沈心远
1.广东省心血管病研究所//广东省人民医院心内科,广东 广州,5100802.广东省心血管病研究所//广东省人民医院心内科,广东 广州,5100803.广东省心血管病研究所//广东省人民医院心内科,广东 广州,5100804.广东省心血管病研究所//广东省人民医院心内科,广东 广州,5100805.广东省心血管病研究所//广东省人民医院心内科,广东 广州,5100806.广东省心血管病研究所//广东省人民医院心内科,广东 广州,5100807.广东省心血管病研究所//广东省人民医院心内科,广东 广州,510080
摘要：目的：研究蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12（PTPN12）对心脏HERG钾通道电流的调控作用。方法（1）质粒构建和基因转染：PCR技术构建各种质粒，应用脂质体将各种质粒转染HEK293细胞，经G418筛选获得稳定表达的细胞株；（2）应用抗PTPN12抗体进行Western blotting分析检测PTPN12的表达；（3）细胞电生理检测：应用膜片钳技术检测单独表达HERG组（HEK293/HERG细胞）、PTPN12过度表达组（将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERG细胞）、PAO处理组（PTPN12/HERG组基础上加入抑制剂PAO）、herg突变组（将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERGY327A-Y700A-Y845A细胞株）的HERG钾通道电流。结果（1）成功构建herg突变质粒和pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒，并获得稳定表达的细胞株；（2）共转染pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒的HEK293/HERG细胞在荧光显微镜下可观察到PTPN12-RFP在细胞中的表达，Western blotting可检测到PTPN12的表达；（3）PTPN12过度表达组脉冲电流密度明显低于对照组（P<0.01），PAO处理组和herg突变组电流密度明显高于PTPN12/HERG组（P<0.01）。结论PTPN12对心脏HERG钾通道电流具有明显负性调控作用，其可能机制是PTPN12减弱了HERG钾通道酪氨酸磷酸化程度。这一发现有助于更深刻理解HERG钾通道调控机制和长QT综合征发病机制。
关键词：长QT综合征HERG钾通道蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12膜片钳技术
资助基金：国家自然科学基金(81070151)广东省自然科学基金(S2012010009324)Supported by National Natural Science Foundation of China (81070151)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1718-1722 )
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