小鼠生精相关基因pQE/Dnajb13重组载体的构建和蛋白表达
朱莉
刘刚
1.中南大学生殖与干细胞工程研究所,湖南 长沙,4100782.中南大学生殖与干细胞工程研究所,湖南 长沙,410078
摘要：目的：利用分子克隆技术构建重组表达载体pQE/Dnajb13，在大肠埃希菌中高效表达、鉴定并纯化。方法应用RT-PCR技术，以小鼠睾丸cDNA文库为模板扩增Dnajb13基因全长开放阅读框，将其连接到pQE载体后测序鉴定；将重组质粒转入宿主菌E.coli M15，经IPTG诱导表达His/Dnajb13融合蛋白，Ni2+亲和层析纯化融合蛋白，采用SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行分析和鉴定。结果成功构建了pQE/Dnajb13重组质粒，测序结果与预期一致；转化重组质粒的E.coli M15经IPTG 37℃诱导4 h后高效表达His/Dnajb13融合蛋白。结论成功进行了pQE/Dnajb13重组质粒的构建和重组蛋白的表达，为Dnajb13基因的功能研究奠定了基础。
关键词：Dnajb13Dnajb蛋白蛋白表达精子发生
资助基金：国家自然科学基金(81070531)Supported by National Natural Science Foundation of China (81070531)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1757-1760 )
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