副溶血弧菌基因回补实验方法的建立与应用
陈振鸿1
王丽2
张义全3
冯娇3
杨瑞馥3
常德1
安莉1
刘长庭1
周冬生3
1.解放军总医院南楼呼吸科,北京,1008532.重庆医科大学检验医学院，重庆 400016; 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室，北京 1000713.军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071
摘要：目的：建立以pBAD33质粒为载体的副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus, VP）基因回补实验平台。方法PCR扩增aphA和opaR的整个ORF区序列，并将其直接克隆入pBAD33质粒中，构建重组质粒。分别将重组质粒转入到ΔopaR和ΔaphA中（分别代表opaR和aphA的突变株），以构建出相应的回补株C-ΔaphA和C-ΔopaR。分别在aphA和opaR基因内设计特异性引物，采用RT-PCR方法，验证在相应的回补突变株中aphA和opaR是否转录。利用引物延伸实验研究野生株（WT）、ΔopaR、ΔaphA、C-ΔaphA和C-ΔopaR中mfpA（aphA负调控，opaR正调控其表达）的相对RNA水平。结果 aphA和opaR在相应的回补株中发生转录；且mRNA水平与野生株一致。结论成功建立了以pBAD33质粒为载体的VP基因回补方法，并得到应用。
关键词：副溶血弧菌基因回补pBAD33aphAopaR
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 70-74 )
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