靶向VEGF的miRNA对恶性黑色素细胞增殖和凋亡的影响
蒋源1
韩永智1
孙建2
1.广东省人民医院//广东省医学科学院皮肤科,广东 广州,5100802.广东省人民医院//广东省医学科学院普通外科,广东 广州,510080
摘要：目的：研究靶向血管内皮生长因子（VEGF）基因的外源性miRNA对恶性黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法根据VEGF基因序列设计合成4对miRNA干扰片段，构建质粒真核表达载体，分别为X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4，测序分析鉴定插入序列的完整性；脂质体法将该4个重组表达载体转染黑色素瘤细胞株SKmel-28，RT-PCR检测转染细胞中VEGF基因的mRNA表达变化，Western blotting检测miRNA对VEGF蛋白表达水平的调控效应，明确抑制效果最为显著的miRNA干扰序列。MTS法和流式细胞仪分别检测人工合成的靶向VEGF的miRNA对SKmel-28生长的抑制作用，以及对肿瘤细胞凋亡的影响。结果测序分析证实4个重组体插入片段的碱基序列均完全正确，成功转染SKmel-28细胞后，均能显著抑制肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白的表达，与对照组相比有显著性差异（P<0.01）。抑制效应最强的重组载体是X-26-2n-1，MTS法和流式细胞仪检测显示，SKmel-28细胞转染X-26-2n-1后，细胞增殖受到明显抑制，增殖抑制效应具有时间依赖性，与阴性对照组比较差异具有显著性（P<0.05），与空白组比较细胞增殖抑制更加明显（P<0.01）；肿瘤细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率也显著高于对照组（P<0.01）。结论外源性靶向VEGF的miRNA能够显著降低黑色素瘤细胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的表达水平，抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡。
关键词：黑色素瘤miRNA血管内皮生长因子细胞增殖凋亡
资助基金：广东省科技计划(2010B080701022)广东省科技计划(2010B080701021)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 358-363 )
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